Какие виды ВЭЖХ колонок существуют? Классификация ВЭЖХ по типу фаз и режимов

— самый распространённый метод. Здесь неподвижная фаза покрыта длинными гидрофобными цепочками (C18, C8 или ароматическими фенильными группами), а в подвижную фазу добавляют воду и органический растворитель (ацетонитрил или метанол). За удерживание отвечают в первую очередь дисперсионные ван-дер-Ваальсовы силы, а для фенильных фаз — ещё и π-π взаимодействия. В результате наиболее гидрофобные и ароматические соединения — например, лекарственные молекулы, пептиды или белки — задерживаются дольше, чем более полярные вещества.

наоборот, использует полярную неподвижную фазу (чистой формы силикагель, аминопропил, цианопропил, диол-группы) и неполярные растворители (гексан, эфиры, изооктан). Механизм удерживания — адсорбция молекул на полярных участках поверхности через водородные связи и диполь-дипольные взаимодействия. Этот режим идеально подходит для анализа углеводов, липидов и жирорастворимых витаминов, которые в RP-системе плохо держатся.

сочетает в себе полярную неподвижную фазу (диол, амид, заряженные ZIC-группы, циано или аминогруппы) с преимущественно органической подвижной фазой (до 95 % ацетонитрила плюс небольшое количество воды или буфера). На поверхности фазы образуется тонкий водный слой, и вещества распределяются между этой «гидратной плёнкой» и органическим растворителем. Так хорошо разделяются очень полярные аналиты — нуклеотиды, аминокислоты, органические кислоты и гидрофильные пептиды.

напоминает RP, но работает в условиях высокого солевого насыщения. Вода с солями «смывает» солватные оболочки гидрофобных сайтов белков, усиливая их взаимодействие с умеренно гидрофобными алкильными группами фазы. Этот режим часто применяют для разделения форм моноклональных антител и белковых конформаций.

опирается на электростатическое притяжение или отталкивание между зарядами аналитов и заряженными группами на неподвижной фазе (антиониты с –SO₃⁻ или катиониты с –NR₃⁺). В подвижную фазу вводят буферный раствор, и изменение состава или pH позволяет последовательно элюировать анионы, катионы, аминокислоты и пептиды.

Mixed-Mode-колонки объединяют гидрофобное (RP) и ионообменное (IEX), а иногда и нормально-фазовое (NP) удерживание. Благодаря этому одной колонкой и одним методом можно разделить одновременно неполярные остовы, полярные и заряженные фрагменты — идеально для амфифильных молекул, фосфолипидов и сложных биомолекул.

использует специфические лиганды (например, Protein A для IgG-антител или ниистаг-таги для рекомбинантных белков), привязанные к носителю. Механизм — селективное сродство аналита к лиганду, что позволяет очень чисто выделять целевой белок или фермент из сложных смесей.

разделяет вещества по размеру. Пористые шарики в колонке позволяют мелким молекулам заходить в поры и тем самым задерживаться дольше, а крупные проплывают быстрее. Так проводят фракционирование белков, полисахаридов и синтетических полимеров.

основана на стереоспецифическом взаимодействии энантиомеров с хиральными лигандами на фазе (циклические декстрины, полипептиды и прочие). Один из энантиомеров задерживается сильнее, чем другой, что позволяет разделять зеркальные формы лекарственных и биомолекул.

— гибрид RP-метода, в котором в подвижную фазу вводят ион-пейр реагент (например, ТЭА-соли). Он образует нейтральные комплексы с ионизированными аналитами (органическими кислотами, основаниями, нуклеозидами), после чего эти комплексы удерживаются на RP-фазе и элюируются при изменении кислотности или органической компоненты.

использует синтетические полимерные носители, устойчивые к экстремальным pH и агрессивным средам. При этом молекулы-мишени могут быть «запечатаны» в полимере (импринтинг), что обеспечивает селективное захватывание похожих по структуре соединений.