Как эффективно выполнять ВЭЖХ
13.08.2025HILIC HPLC или ВЭЖХ с гидрофильным взаимодействием
06.10.2025✅ Принцип НФХ:
-
Стационарная фаза — полярная, чаще всего это непокрытый силикагель (SiOH) или фазы, содержащие полярные группы (амин, диол, циано).
-
Подвижная фаза — неполярная или слабо полярная: гексан, гептан, изопропанол, хлороформ, диэтиловые эфиры, этилацетат (как добавки, что сокращает время удерживания полярных соединений).
-
Разделение основано на полярности — чем более полярный анализируемый компонент, тем дольше он удерживается. Первыми элюируются наименее полярные соединения, за которыми следуют соединения с возрастающей полярностью.
| Характеристика | NP-HPLC | RP-HPLC |
| Стационарная фаза | Полярная (SiOH, NH₂, CN) | Неполярная (C18, C8, фенильная) |
| Подвижная фаза | Неполярная (гексан, этиловый эфир) | Полярная (вода, ACN, MeOH) |
| Механизм разделения | Чем полярнее соединение, тем сильнее удерживается | Чем менее полярно, тем дольше удерживается |
| Проблемы | Нестабильность, градиенты сложнее | Лучше автоматизируется |
| Тип фазы | Группы на поверхности | Полярность | Основной механизм удерживания | Примеры производителей / колонок |
| Силика (SiOH) | Силанольные группы | Очень высокая | Водородные связи, дипольные | Agilent Zorbax Sil, Phenomenex Luna Silica |
| Амино (NH₂) | Аминопропил | Средняя–высокая | Водородные связи, слабое основание | YMC Pack NH₂, Waters Spherisorb NH₂ |
| Циано (CN) | Цианопропил | Средняя | Диполь-диполь, слабые водородные | Agilent Zorbax CN, Thermo Hypersil CN |
| Диол | Дигидроксипропил | Средняя | Водородные связи, HILIC | Luna Diol, ACE Diol |
